HPLC
Normalphasen- bzw. Umkehrphasen-Hochleistungs-Flüssigchromatographie (NP-HPLC bzw. RP-HPLC).
Die HPLC (high performance liquid chromatography) ist eine Flüssigchromatographie-Methode, bei der die Probe unter hohem Druck durch eine Säule läuft. Bei der Normalphasen-HPLC ist die mobile Phase nicht polar und die stationäre Phase polar. Bei der Umkehrphasen-HPLC ist die Polarität der beiden Phasen umgekehrt, sodass die Analyten nur hydrophoben Wechselwirkungen ausgesetzt sind. Polare Analyten werden zuerst aus der Säule eluiert, gefolgt von den nicht polaren Analyten.
Die RP-HPLC wird weitaus häufiger eingesetzt als die NP-HPLC, da kleine Änderungen der Zusammensetzung der mobilen Phase (z. B. Salze, pH, organische Lösungsmittel) oder der Temperatur die Trenneigenschaften des Systems völlig ändern. Damit ist diese Methode sehr empfindlich und flexibel.
RP-HPLC in Verbindung mit UV-Spektroskopie (LC-UV) wird für viele Anwendungen verwendet:
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Aminosäure Analyse (AAA), Abschätzung bzw. genaue Bestimmung des Extinktionskoeffizienten
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Flüssigchromatographie-Profil: 'Fingerprinting' gemäß der Richtlinie ICH Q6B
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Analyse von Aldehyden in Luftproben; die Luftproben werden am Standort in Probengefäßen genommen und zur Analyse an SGS M-Scan eingeschickt. Formaldehyd wird zum Beispiel oft auf diese Weise analysiert.
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Präparative LC-UV wird zur Herstellung von Reinfraktionen eingesetzt, die dann für die Bestimmung des Molekulargewichts oder Strukturaufklärungen verwendet werden können, z. B. 1HNMR-Analyse
HPLC kombiniert mit Massenspektrometrie ist eine überaus leistungsfähige Methode, die in vielen Bereichen zum Einsatz kommt. Siehe LC-MS, LC-MS/MS
